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Título del Trabajo: Cinética de liberación del factor de crecimiento derivado de plaquetas (PDGFBB) a partir de un gel de fibrina preparado con plaquetas obtenidas por aféresis.

Autores: Willy Cerón; Milagros Pinto; Sthefanie Cabrel; Marco Cabello; Iván Lozada-Requena; Sandra Jara y José L. Aguilar

Institución: Laboratorio de Inmunología LID 108. Departamento de Ciencias Celulares y Moleculares. Facultad de Ciencias – UPCH.

Objetivos: Determinar la cinética de liberación del PDGF-BB en función al tiempo de incubación en un gel de fibrina con diferentes concentraciones de fibrinógeno (factor de coagulación) una concentración plaquetarias conocida las cuales fueron obtenidas por aféresis para su potencial uso en cicatrización de úlceras.

Material y Métodos: Las plaquetas fueron obtenidas por aféresis, teniendo el producto un recuento de 1650x106 pq/ul, se preparó tres concentraciones de plaquetas de 1.5x106 pq/ul (A), 1.5x106 + 14% fibrinogeno (B) 1.5x106 + 7% fibrinogeno (C). El gel de fibrina fue preparado usando como activadores el gluconato de calcio (GCa) y trombina autóloga que fue obtenida luego de la activación de la cascada de coagulación por adición de GCa e incubación a 37°C por 60 minutos. El producto final se obtuvo mezclando en placas de cultivo de 6 pozos 3 ml de las plaquetas de aféresis en las tres concentraciones previamente preparadas, adicionando en cada pozo la solución activadora gluconato + trombina (1:1). Seguidamente las placas fueron incubadas a 37 °C y 5% de CO2, colectando el líquido liberado por el gel a las 12, 48, 96 y 120 horas pos incubación y las muestras congeladas a -20°C para su análisis. El PDGF-BB fue medido en todos los preparados mediante el método de ELISA (Human PDGF-BB DuoSet ELISA, R&D Systems Inc.).

Resultados: La cinética de liberación dieron los siguientes valores de PDGF-BB a las 12 horas en los preparados con la concentración de plaquetas A, B y C fue de 22.7 ng/mL, 34.9 ng/mL y 51.49 ng/mL respectivamente; a las 48 horas fue 45.7 ng/mL, 47.8 ng/mL, 47.5 ng/mL respectivamente; a las 96 horas fue 46.5 ng/mL, 44.8 ng/mL, 44.0 ng/ml respectivamente y a las 120 horas fue 46.2 ng/mL, 40.4 ng/mL, 41.8 ng/mL.

Conclusiones: El producto desarrollado mantiene una producción constante de PDGF-BB teniendo mayores niveles a las 12 horas cuando se adiciona un 7% de fibrinógeno en los geles de fibrina. La concentración de 1.5x106 permite una liberación constante y en gran concentración del factor de crecimiento, en comparación con otros estudios, que usan como fuente de plaquetas sangre obtenida en tubos al vacio.

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